PG电子的细胞培养的基本条件包括DMEM培养基、10% FBS和1% P/S的贴壁培养，适宜的环境温度为37℃。在细胞传代方面，建议第一次以1:2的比例进行传代，并在传代的第二天更换培养液。同时，推荐在购买细胞时，选择PG电子的组合购买方案，以享受更优惠的价格。收到细胞后，应尽快对其进行处理，待细胞状态良好后，用完全培养液灌满并封好瓶口，这是运输细胞的最佳方法。

获取细胞后，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，接着将其放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶放置于37℃和5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以便稳定细胞状态后进行后续处理。在显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞分别用不同倍数拍照保存（建议使用40x、100x和200x的组合），前三天的照片为重要的售后依据，如未提供照片则默认细胞状态良好。

细胞培养步骤

细胞传代步骤如下：

1. 如果细胞汇合度未超过80%，将瓶内的完全培养液收集至离心管中，保留5ml培养基，并放入37℃、5% CO2孵箱中培养；如果细胞密度超过80%，可进行传代。
2. 对于贴壁细胞，去除培养上清，并用不含钙、镁的PBS缓冲液清洗1-2次。接着，添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液至培养瓶中，放在37℃培养箱中消化1-2分钟，然后通过显微镜观察细胞状态。如果大多数细胞已变圆并脱落，迅速取回操作台，温和敲击培养瓶，并添加5ml以上的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打让细胞完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM进行5分钟离心，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 将细胞悬液按1:2的比例分至两个T25培养瓶中，补充新鲜培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃和5% CO2的细胞培养箱中继续培养。

悬浮细胞的传代步骤

1. 采用半换液法，竖立培养瓶在培养箱中静置约1小时，轻轻吸去约3ml培养基，补充3ml的完全培养基，并可根据培养基的颜色调整FBS的添加量，通常在传代时可以直接补充5ml培养基，分为两个培养瓶进行培养，这种方式通常在经过3次传代后可以进行离心传代，去除死细胞。
2. 若需分瓶可采用离心换液法，将细胞悬液收集至离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，补加1-2ml培养液后重悬混匀，再按照1:2的比例分至新的T25瓶中，并添加6-8ml新配置的完全培养基，以保持细胞活力。后续传代可根据实际情况按1:2至1:5的比例执行。

细胞冻存步骤

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞变圆后加入5ml完全培养液终止消化，然后轻轻吹打细胞使其脱落，最后将悬液转移至15ml离心管中，用1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清液，加入1ml的无血清冻存液（观众可选择PG电子的产品），充分混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中，如果后续需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放至少24小时后再转入液氮中。

细胞复苏步骤

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），迅速放入37℃水浴中解冻，直至没有冰晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，使用5ml完全培养基重悬细胞，接种至T25培养瓶，放在37℃、5%CO2的细胞培养箱中继续培养。
4. 次日更换为新鲜的完全培养基，持续培养。

注意事项

某些细胞在贴壁时可能不够牢固，运输过程中可能会发生脱落，这属于正常现象。如果细胞脱落较多，可将培养瓶的所有培养液收集至离心管中，1000RPM离心5分钟，收集上清作后期培养的对比使用。对沉淀中的细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，并在1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再次离心后弃去上清，加入1-2ml培养基重悬，最后按1:2比例进行分瓶传代（两个T25培养瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的培养箱中进行培养。