PG电子人恶性黑色素瘤细胞WM115培养及冻存指导

一、细胞培养条件

细胞名称：人恶性黑色素瘤细胞WM115

生长特性：贴壁

冻存条件：推荐使用无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：初次建议比例为1:2

备注：在传代后2天更换培养液。使用无菌离心管收集瓶内培养基，作为过渡对比培养用。如对比结果不佳，建议直接购买PG电子的完全培养基。

二、细胞处理与运输

收到细胞后建议尽快培养至良好状态，充满完全培养液并密封瓶口以确保细胞的最佳运输状态。在处理前，用75%酒精喷洒细胞瓶并在超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后进行后续操作。显微镜下观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片以备后用（建议40x、100x和200x各一张）。前三天的照片非常重要，如未提供照片则默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，保留5ml完全培养基在37℃、5% CO2环境中培养；若超过80%，则进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次。
2. 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；如大部分细胞变圆脱落，轻敲培养瓶后加入超过5ml的完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落并吸出悬液，转移至15ml离心管中，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清液后重悬于1-2ml完全培养基。
4. 按1:2的比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，放入37℃、5% CO2细胞培养箱中。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长达到培养瓶80%覆盖度时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 加入约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，并轻轻吹打使之脱落，转移至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀细胞后加入1ml的PG电子无血清冻存液，混匀后转移至冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱中存放，若需转入液氮罐，需至少在-80℃冰箱中存放24小时后再进行转移。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管，迅速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶后用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，沉淀后用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2环境中培养。
4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

某些细胞在运输过程中可能不牢固而导致细胞脱落，这是正常现象。如果脱落较多，可收集所有培养液于离心管中，1000RPM离心5分钟，留取上清进行过渡培养。沉淀细胞后加入1-2ml胰酶，轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再离心、弃上清，补充1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

若细胞出现问题，可能的重发情况包括：运输过程中遇到细胞丢失、瓶身破损、泄漏等；细胞污染问题需在收到后48小时内提供真实的实验结果以核实；常温或干冰运输细胞复苏后存活情况不佳需提供清晰照片等。具体情况需与技术人员沟通确认，若判定为我方责任会进行重发。

不予重发的情况包括：客户造成的细胞污染、错误操作导致状态不佳等。

使用PG电子提供的细胞培养产品，确保获得最佳实验结果。